A cromatografia em camada fina é um método de análise química baseado no uso de uma camada sorvente com espessura de 0,1-0,5 mm como fase estacionária. O método TLC pode ser usado em vários campos e permite a determinação de uma grande variedade de compostos químicos.
Princípio do método
O método da cromatografia em camada delgada nasceu da cromatografia em papel e os primeiros experimentos foram realizados na década de 80 do século XIX. O uso ativo desta análise começou somente após 1938.
A técnica de TLC inclui uma fase móvel (eluente), uma fase estacionária (sorvente) e um analito. A fase estacionária é aplicada e fixada em uma placa especial. A placa pode ser de vidro, alumínio ou plástico - são substratos reutilizáveis que devem ser bem lavados, secos e preparados para a aplicação do sorvente após cada uso. Também é possível usar pratos de papel que são descartados após o uso.
A sílica gel é mais frequentemente usada como fase estacionária, mas é possível usar outros sorventes, por exemplo, óxido de alumínio. Ao usar este ou aquele sorvente, a tecnologia deve ser rigorosamente seguida para que o resultado seja preciso, por exemplo, porque o gel de sílica pode dar um resultado incorreto se o ar do laboratório estiver muito úmido.
Os solventes são usados como fase móvel, por exemplo, água, ácido acético, etanol, acetona, benzeno. A escolha de um solvente deve ser feita com responsabilidade, pois o resultado da cromatografia depende diretamente de suas qualidades (viscosidade, densidade, pureza). Um solvente individual é selecionado para cada amostra analisada.
Análise
A amostra deve ser diluída em um solvente. Se a dissolução completa não ocorrer e muitas impurezas permanecerem, a amostra pode ser limpa por extração.
A aplicação da amostra na placa pode ser feita de forma automática ou manual. A aplicação automática usa um método de micropulverização em que cada amostra é pulverizada na área apropriada do substrato. Para aplicação manual, é usada uma micropipeta. Marcas de lápis são colocadas na placa para cada amostra. Cada amostra é aplicada com um capilar à placa em uma linha a uma distância suficiente das marcas para não reagir com o carbono do chumbo.
A placa é colocada em um recipiente, no fundo do qual o eluente é derramado. O suporte é colocado com uma extremidade no vaso até a linha marcada. O recipiente é totalmente fechado para evitar a evaporação da fase móvel. Sob a ação de forças capilares, o eluente começa a subir pela camada sorvente. Quando o eluente atinge um determinado nível, a placa é removida do recipiente e seca.
Se a substância desejada não tiver cor, não será visível no substrato. Portanto, a visualização é realizada - processamento da placa com vapor de iodo ou outros corantes.
Após esse processamento, o resultado é avaliado. Áreas coloridas de intensidade variável aparecem no sorvente. Para determinar uma substância (ou grupo de substâncias), as áreas coloridas, seu tamanho, intensidade e mobilidade são comparados com uma amostra de referência.
O método TLC é amplamente utilizado porque é rápido, barato, preciso, intuitivo, não requer equipamentos complexos e é fácil de interpretar.
